來(lái)源:http://www.temaiwo.cn/ 時(shí)間:2019-06-04
色譜填料應(yīng)用和保養(yǎng)很重要的是在位消毒和清洗,其中在位消毒可以將病原微生物的污染降低到極低水平,我們生活中常常用高溫消毒,但并不是所有的填料都能高溫消毒,例如FF系列的填料可以120℃ 20min,但是4B/6B的基球卻難以耐受高于45℃的溫度(長(zhǎng)時(shí)間高于45℃會(huì)破壞填料).稻王分享常見(jiàn)填料的在位消毒和清洗方法.
通常用 0.5~1M NaOH 以合適的流速消毒 1~2 個(gè)小時(shí),在位清洗是清除填料或柱子中的沉淀及未洗凈物質(zhì),一般填料用 10 次后至少需要做 1 次這樣的操作,具體操作和在位消毒一樣,做在位清洗或消毒都可以互相代替,無(wú)須做兩步都做。
具體方法為:
1.離子交換,凝膠過(guò)濾,疏水色譜填料可以用 1M以 NaOH以 30cm/h反向沖洗 3~5 個(gè)柱床體積,然后再用 3~5 個(gè)柱床體積的平衡緩沖液再生即可。
2.去除疏水性強(qiáng)的雜質(zhì)一般方法是先用純水洗 3 個(gè)柱床體積,然后再用 70%的乙醇或 30%的異丙醇含 0.5%的 Triton 或吐溫洗 5~10個(gè)柱床體積,然后用純水洗 3~5 個(gè)柱床體積即可。對(duì)于離子交換柱子上吸附的色素可以用 0.2~0.5M 醋酸洗 3~5 個(gè)柱床體積。
3.此外也可以采用 6M 鹽酸胍洗去一些因?yàn)闅滏I而聚集的雜質(zhì)(多糖核酸等),通常也洗 5-10 個(gè)柱體積。
4.對(duì)于親和填料中的小分子的配基如 GST 瓊脂糖凝膠、IDA/NTA 瓊脂糖凝膠、賴(lài)氨酸瓊脂糖凝膠、藍(lán)色瓊脂糖凝膠、肝素瓊脂糖凝膠、苯甲脒瓊脂糖凝膠可以采用以上的方法進(jìn)行位消毒和清洗。
注意:大多填料的壽命下降不是因?yàn)榕浠撀洌请s質(zhì)包裹或者吸附牢固導(dǎo)致填料可用功能基團(tuán)減少而載量效率下降,因此只要處理得當(dāng)是可以延長(zhǎng)填料的壽命的,這對(duì)降低工業(yè)用戶(hù)填料成本有很重要的意義。
大多數(shù)填料的壽命下降不是因?yàn)榕浣o脫落,而是雜質(zhì)包裹或者吸附牢固導(dǎo)致填料可用功能集團(tuán)減少而載量效率下降,因此只要處理得當(dāng)是可以延長(zhǎng)填料的壽命的。這對(duì)工業(yè)用戶(hù)填料成本有很重要的意義。
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